HPLC und LC-MS: zwei Fragen, zwei Verfahren

HPLC: das Wettrennen durch die Säule

HPLC ist die Abkürzung für einen langen Namen. Was dahintersteckt, ist aber gut vorstellbar: ein Wettrennen.

Die Probe wird aufgelöst und mit hohem Druck durch ein enges, gefülltes Röhrchen gedrückt – die Säule. Manche Bestandteile bleiben unterwegs häufiger hängen als andere. Deshalb kommen sie nicht alle gleichzeitig am Ende an, sondern nacheinander. Was verschieden ist, trennt sich so von selbst auf.

Am Ausgang sitzt ein Messgerät und registriert jeden, der ankommt. Das Ergebnis ist eine Kurve mit Bergen: ein großer Berg für den Hauptbestandteil, kleine für alles andere.

Wie groß der Hauptberg im Vergleich zu allen Bergen zusammen ist, ergibt die Reinheitsangabe. HPLC beantwortet also die Frage: Ist alles dasselbe?

Massenspektrometrie: die Waage für Moleküle

Das zweite Gerät wiegt. Ein Massenspektrometer bestimmt, wie schwer ein einzelnes Molekül ist.

Das hilft, weil jedes Peptid ein ganz bestimmtes Gewicht hat – es ergibt sich aus den Bausteinen, aus denen die Kette besteht. Man kann dieses Gewicht vorher ausrechnen. Stimmt der gemessene Wert mit dem berechneten überein, ist das ein starker Hinweis, dass wirklich der richtige Stoff im Fläschchen ist.

Diese Messung beantwortet die andere Frage: Ist es das Richtige?

Warum eine Zahl allein nicht reicht

Die beiden Fragen haben nichts miteinander zu tun – und das ist der Punkt, an dem viel schiefgelesen wird.

Eine Probe kann in der HPLC einen einzigen, sauberen Berg zeigen und trotzdem der falsche Stoff sein. Dann ist eben alles dasselbe, nur leider das Falsche. „99 % rein“ sagt nichts darüber,was zu 99 % drin ist.

Umgekehrt zeigt die Waage zwar, dass der richtige Stoff da ist, aber nicht zuverlässig, wie viel Fremdes daneben liegt. Manche Stoffe lassen sich vom Gerät leichter erfassen als andere. Aus der Höhe eines Signals lässt sich deshalb nicht einfach auf eine Menge schließen.

Erst zusammen ergeben die beiden ein vollständiges Bild.

LC-MS: beides hintereinander

Bei LC-MS wird die Säule direkt an die Waage angeschlossen. Erst trennt sich alles auf, dann wird jeder Ankömmling einzeln gewogen.

Der Vorteil: Auch die kleinen Berge bekommen einen Namen. Ohne diese Kopplung bleiben sie namenlose Ausschläge in der Kurve.

Auf einen Blick

• HPLC: trennt auf und zählt Anteile. Antwort auf „wie einheitlich“.
• MS: wiegt Moleküle. Antwort auf „welcher Stoff“.
• LC-MS: beides nacheinander, dadurch lassen sich auch die Nebenbestandteile benennen.
• Eine Reinheitszahl ohne Nachweis, was gemessen wurde, ist eine halbe Aussage.

Diese Seite beschreibt Analyseverfahren und ihre Aussagekraft. Sie enthält keine Bewertung einzelner Anbieter und keine Anwendungsempfehlung.